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流式细胞仪检测细胞流程

发布时间:2022-03-14      点击次数:586
  流式细胞仪检测细胞实验步骤:
 
  1. 细胞收集:悬浮细胞直接收集到10ml的离心管中,每样本细胞数为(1~5)×106,/mL 500~1000r/min离心5min,弃去培养液。
 
  2. 用孵育缓冲液洗涤1次,500~1000r/min离心5min。
 
  3. 用100ul的标记溶液重悬细胞,室温下避光孵育10~15min。
 
  4. 500~1000r/min离心5min沉淀细胞孵育缓冲液洗1次。
 
  5. 加入荧光(SA-FLOUS)溶液4℃下孵育20min,避光并不时振动。
 
  6. 流式细胞仪分析:流式细胞仪激发光波长用488nm,用一波长为515nm的通带滤器检测FITC荧光,另一波长大于560nm的滤器检测PI。
 
  7. 结果判断:凋亡细胞对所有用于细胞活性鉴定的染料如PI有抗染性,坏死细胞则不能。细胞膜有损伤的细胞的DNA可被PI着染产生红色荧光,而细胞膜保持完好的细胞则不会有红色荧光产生。因此,在细胞凋亡的早期PI不会着染而没有红色荧光信号。正常活细胞与此相似。在双变量流式细胞仪的散点图上,左下象限显示活细胞,为(FITC-/PI-);右上象限是非活细胞,即坏死细胞,为(FITC+/PI+);而右下象限为凋亡细胞,显现(FITC+/PI-)。
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